Test qualitativo Rt Pcr CE del nuovo kit di test dell'acido nucleico del coronavirus COVID-19

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[Nome del prodotto]

 

Kit di rilevamento dell'acido nucleico del nuovo coronavirus (COVID-19).

(Metodo RT-PCR in tempo reale)

 

[Specifiche del pacchetto]

50 test/kit e 200 test/kit

 

[Uso previsto]

 

Questo kit è utilizzato per il rilevamento dell'acido nucleico COVID-19 (ORF1ab/N Gene) e

diagnosi assistita e sorveglianza epidemiologica del COVID-19.Questo è un

test PCR qualitativo per la rilevazione dell'acido nucleico nei tamponi rinofaringei

da pazienti con sindrome respiratoria acuta grave coronavirus 2 (SARS-CoV-2).

I pazienti possono avere malattie respiratorie da lievi a gravi con sintomi di mal di gola,

tosse, febbre e mancanza di respiro e molti hanno avuto complicazioni tra cui

polmonite.I pazienti possono anche essere individui asintomatici con recente nota o

sospetta esposizione a SARS-CoV-2 o individui asintomatici senza informazioni note

o sospetta esposizione a SARS-CoV-2 per l'identificazione precoce in contesti speciali.

 

[Descrizione del prodotto]

 

SARS-CoV-2 Nucleic Acid Test Kit è un test PCR in tempo reale destinato alla rilevazione qualitativa nei geni ORF1ab e N degli acidi nucleici virali SARS-CoV-2 in campioni faringei (tamponi orofaringei, tamponi rinofaringei) da individui sospettati di COVID-19 dal proprio operatore sanitario.

 

[Principio di prova]

Il kit adotta il principio della tecnologia PCR quantitativa fluorescente in tempo reale,

progetta primer e sonde specifici per COVID-19 (gene ORF1ab/N),

e li combina con uno strumento PCR quantitativo fluorescente in tempo reale

rilevare l'acido nucleico del virus COVID-19.In modo da realizzare la rilevazione qualitativa

dell'acido nucleico del virus COVID-19.

Inoltre, il sistema di rilevamento PCR utilizza il controllo interno positivo,

che monitora la presenza di inibitori della PCR nei campioni di prova rilevando

se il segnale di controllo interno è normale, per evitare un risultato falso negativo.

 

[Componenti del kit diagnostico]

No.	Nome del reagente	Spec.& Qtà.
		50T	200 t
1	Miscela PCR COVID-19	750µl x 1 provetta	Tubo da 750µl x 4
2	Miscela di enzimi COVID-19	250µl x 1 tubo	Tubo da 250µl x 4
3	Controllo negativo COVID-19	100µl x 1 provetta	Tubo da 100µl x 4
4	Controllo positivo COVID-19	100µl x1 tubo	100µl x4provette
5	Istruzioni	1 porzione	1 porzione

 

Nota:

1. Non mescolare o scambiare componenti di lotti di kit diversi.

2. Il controllo negativo COVID-19 è costituito da acqua sterile priva di nucleasi e il controllo negativo COVID-19

Il controllo positivo è l'RNA trascritto in vitro che contiene i geni target ORF1ab,

gene N e gene del controllo interno.

 

 

[Strumento applicabile]

 

Il kit diagnostico è applicabile a MA-6000, serie ABI, serie Bio-Rad, Roche

LightCycler R480, Cepheid SmartCycler, serie Rotor-Gene e altri multicanale

strumenti di PCR quantitativa in tempo reale.

 

[Requisiti del campione]

 

1. Tipi di campioni: campioni del tratto respiratorio superiore (compresi tamponi faringei,

tamponi nasali, estratti rinofaringei tosse profonda espettorato), tratto respiratorio inferiore

campioni (inclusi estratti delle vie respiratorie, lavaggio alveolare fluido di lavaggio bronchiale

fluidi, campioni bioptici di tessuto polmonare), coltura di tessuti e altri campioni.

2. Condizioni di conservazione: i campioni raccolti devono essere sottoposti a ispezione

in modo tempestivo e i campioni devono essere conservati a 4 ℃ entro 24 ore.

È meglio conservare a -70 ℃ per più di 24 ore ed evitare ripetuti congelamento-scongelamento

cicli.

 

[Stoccaggio e stabilità]

 

1. Il kit diagnostico deve essere conservato in un sacchetto sigillato a -20 ± 5 ℃. La data di scadenza

è di 12 mesi.

2. Fare riferimento alla data di produzione e alla data di scadenza sulla confezione esterna.

3. Il reagente rimane valido e stabile entro la data di scadenza se non utilizzato.Il kit dovrebbe

non essere congelato e più di 5 volte.

 

[Metodo di prova]

 

1.Preparazione del reagente (eseguita nella "regione di preparazione del reagente")

1.1 Estrarre ogni componente dal kit diagnostico e metterli a temperatura ambiente.

Lasciare che i reagenti si stabilizzino a temperatura ambiente, quindi vortexare ciascuno di essi

rispettivamente per un uso successivo.

1.2 Secondo la quantità di campioni di prova, controllo positivo COVID-19 e

Controllo negativo COVID-19, pipettare la quantità appropriata di COVID-19 PCR Mix

e COVID-19 Enzyme Mix (COVID-19 PCR Mix 15 µl/test+COVID-19 Enzyme

Mescolare 5 µl/test) mescolarli accuratamente per fare in modo che una miscela PCR-Master lo centrifughi

istantaneamente per un uso successivo.

Nome del reagente	1 campione	10 campioni	25 campioni	50 campioni	100 campioni	200 campioni
Miscela COVID-19PCR (µl)	15	150	375	750	1500	3000
Enzima COVID-19 Mescolare(ml)	5	50	125	250	500	1000
Mastermix PCR	20	200	500	1000	2000	4000
Nota: la configurazione di cui sopra è solo il tuo riferimento e per garantire un volume sufficiente di PCR-Mastermix, potrebbe essere necessario un volume maggiore del pipettaggio effettivo.

1.3 Trasferire i reagenti sopra preparati nella "regione di elaborazione del campione" per

uso successivo.

 

2. Elaborazione e caricamento dei campioni (eseguita presso "campione

regione di elaborazione")

2.1 Questo kit diagnostico non include il kit di estrazione virale di RNA e DNA.è

si consiglia di utilizzare il kit di estrazione di RNA e DNA virale prodotto da Changsha Renji

Medical Equipment Co, Ltd. per estrarre l'RNA virale.L'operazione specifica è in corso

secondo le sue indicazioni.

2.2 Aggiungere 20 µl di PCR-Mastermix nella provetta di reazione per PCR con 5 µl sopra il campione trattato,

Controllo positivo COVID-19 e Controllo negativo COVID-19 e tappare la provetta.Trasportare

rilevamento PCR quantitativo a fluorescenza su uno strumento per PCR a fluorescenza.

 

3.Amplificazione PCR (eseguita nella "zona di amplificazione dell'acido nucleico")

3.1 Posizionare le provette di reazione PCR nei pozzetti dei campioni dell'apparecchiatura di amplificazione

Impostare Controllo positivo COVID-19 Controllo negativo COVID-19 e campioni da ottenere

testato nella sequenza corrispondente e inserire il nome del campione.

3.2 Impostare i parametri del ciclo secondo la seguente tabella per l'amplificazione PCR.

Passi	Temperatura	Volta	Cicli
1	50°C	10 minuti	1
2	95°C	3 minuti	1
3	95°C	10s	40
	55°C	anni '30

Nota:

1) La raccolta della fluorescenza è impostata su "Step3:55°C, 30s".Selezione del rilevamento

canali: FAM, HEX e Cy5, dove il canale FAM è il gene ORF1ab e HEX

il canale è il gene N.Il canale Cy5 è il gene di controllo interno e il sistema di reazione

è impostato su 25 µl.

2) Gli strumenti PCR fluorescenti della serie ABI non selezionano la calibrazione ROX e selezionano

Nessuno per il gruppo di tempra.

 

[Valore di giudizio positivo e intervallo di riferimento]

 

1. Impostazione delle condizioni per l'analisi dei risultati

Il principio di aggiustamento di Baseline e Threshold è generalmente basato sui risultati

dell'analisi automatica dello strumento.Quando la pendenza complessiva della curva

appare, i valori di inizio, fine e soglia della linea di base possono essere regolati

secondo l'immagine.Di solito, l'utente può regolarlo in base al reale

situazione.Il valore iniziale può essere impostato su 3-15 e il valore finale può essere impostato su 5-20.

Regolare la curva di amplificazione del controllo negativo per renderla dritta o inferiore

la linea della soglia.

 

2. La validità del kit

2.1Il controllo positivo COVID-19:I canali FAM, HEX e Cy 5 sono tipici

Curve di amplificazione di tipo S e Cts≤32.

2.2Il controllo negativo COVID-19:I canali FAM, HEX e Cy 5 hanno n

Ct o Ct>38.

2.3Nota:Le condizioni di cui sopra devono essere soddisfatte contemporaneamente, altrimenti questo

l'esperimento non è valido e deve essere ripetuto.

 

3. Il valore del giudizio positivo

Attraverso lo studio dei valori di riferimento, è stato determinato che il valore di riferimento Ct

del gene bersaglio e del gene di controllo interno rilevato da questo kit era entrambi 38.

[Il giudizio del risultato del campione]

 

1.Se il campione del test rileva una curva di amplificazione di tipo S atipica nel FAM, HEX

e Cy 5 e il Ct è ≤38, il campione può essere considerato COVID-19

positivo.

2.Se il campione di prova non ha Ct o Ct>38 nei canali FAM e HEX e

è la curva di amplificazione di tipo S atipica nel canale di controllo interno (Cy 5), Cts≤38,

il campione può essere giudicato negativo al COVID-19.

3.Se il campione di prova ha solo valori Ct 38 in un singolo canale del FAM o HEX

canale, e c'è una curva di amplificazione di tipo S atipica nel controllo interno

channel(Cy 5) , Ct≤38, i risultati devono essere nuovamente testati.Se i risultati sono ripetuti

coerente il campione può essere giudicato positivo al COVID-19, i risultati ripetuti

sono negativi ad eccezione della tipica curva di amplificazione di tipo S del controllo interno

channel(Cy 5), Ct≤38, che potrebbe essere giudicato negativo al COVID-19.

4.Se non viene rilevata alcuna tipica curva di amplificazione di tipo S (nessun valore Ct) o valore Ct> 38

i canali FAM, HEX e Cy 5 del campione di prova, significa che c'è a

problema con la qualità del campione o un problema con il funzionamento.Se il risultato

non è valido, dovresti trovare ed eliminare la causa, prelevare nuovamente il campione,

e ripetere il test (se il risultato del test non è ancora valido, contattare l'azienda).

 

[Limiti del metodo di rilevamento]

1. I risultati dei test del kit diagnostico possono essere utilizzati solo per riferimento clinico.Il clinico

la diagnosi e il trattamento dei pazienti devono essere considerati insieme ai loro

sintomi, segni, anamnesi e altre condizioni correlate.

2. Possono verificarsi risultati falsi negativi quando la concentrazione del nucleico rilevato

l'acido nel campione di prova è al di sotto del limite minimo di rilevamento di questo kit.

3. Manipolazione impropria del campione testato durante la raccolta, il trasporto,

la conservazione e l'elaborazione possono facilmente provocare la degradazione dell'RNA e falsi negativi

risultati.

4. Quando i campioni subiscono una contaminazione incrociata durante la raccolta, il trasporto, lo stoccaggio,

e l'elaborazione, è facile ottenere risultati falsi positivi.

 

[Indice delle prestazioni del prodotto]

1.LOD: il limite di rilevamento è di 200 copie/ml.

2. Precisione: coefficiente di variazione (CV%] del valore Ct di precisione all'interno del batch≤3%.

3.Specificità: non vi è alcuna reazione incrociata tra il kit e i campioni positivi, ad es

come Coronavirus Umano HCoV-NL63, Coronavirus Umano HCoV-OC43, SARS

Coronavirus, MERS Coronavirus, Virus dell'influenza A, Virus dell'influenza B Yamagata,

Victoria, virus dell'influenza H1N1, virus dell'influenza H3N2, virus dell'influenza H5N1,

Virus influenzale H7N9, virus respiratorio sinciziale A, adenovirus (tipo 2),

Adenovirus(tipo 2), Mycoplasma Pneumoniae, Chlamydia Pneumoniae,

Pertosse, Streptococcus Pneumoniae, Rhinovirus(Tipo A) ecc.

 

[Precauzioni]

1. L'intero processo di rilevamento deve essere eseguito rigorosamente in conformità con il

requisiti del presente manuale nell'area di preparazione dei reagenti, nell'area di trattamento dei campioni,

e l'area di amplificazione PCR, e gli abiti sperimentali, gli strumenti,

e i materiali di consumo in ciascuna area devono essere utilizzati indipendentemente e non possono essere mescolati.

2. Per evitare la degradazione dell'RNA, il processo di elaborazione del campione deve essere eseguito a

0-4 ℃ e il test deve essere eseguito immediatamente dopo l'esperimento

completato.I materiali di consumo per utensili utilizzati nell'elaborazione dei campioni devono essere privi di nucleasi.

3.Per ogni esperimento devono essere impostati controlli positivi e negativi.

4.Tutti i reagenti nel kit devono essere completamente scongelati e miscelati a temperatura ambiente e

centrifugato immediatamente prima dell'uso.

5. Tutti i controlli negativi e positivi nel kit devono essere trasferiti al campione

area di preparazione e conservati separatamente prima del primo utilizzo.

6. Per evitare interferenze di fluorescenza, evitare di toccare la provetta di reazione PCR

direttamente a mani nude ed evitare qualsiasi segno sulla provetta di reazione PCR.

7. I parametri relativi all'amplificazione dello strumento devono essere impostati in conformità con

i requisiti pertinenti di questo manuale e diversi lotti di reagenti non possono

essere mescolato.

8. I rifiuti del prodotto durante l'esperimento devono essere disintossicati prima di essere

scartato.

 

[Cos'è l'acido nucleico?]

 

[INDICE DEI SIMBOLI]

[ESPORTATORE]

 

Magnus International Limited

 

F12, New City International Mansion A, 234 Huapao Avenue.

Liuyang, provincia di Hunan 410300 Cina

 

Contatto:Goodwellmedical@gmail.com

 

[PRODUTTORE]

 

Changsha Renji Medical Equipment Co., Ltd.

 

No.18 Xiangtai Road, distretto di Liuyang Jingkai,

Città di Changsha, provincia di Hunan 410300 Cina

 

[RAPPRESENTANTE AUTORIZZATO]

 

Lotus NL BV

Koningin Julianaplein 10, 1e Verd, 2595AA, L'Aia, Paesi Bassi.

[VISTA FABBRICA]

 

 

 

[LABORATORIO DI FABBRICA]

 

 

 

[PRODOTTO E STANDARD]

 

 

[CERTIFICAZIONI]

 

 

 

[FAQ]